www.chinacdoe.com adresini ziyaret ettiğiniz için teşekkür ederiz.Kullandığınız tarayıcı sürümünün CSS desteği sınırlıdır.En iyi deneyim için güncellenmiş bir tarayıcı kullanmanızı (veya Internet Explorer'da Uyumluluk Modunu devre dışı bırakmanızı) öneririz.Bu arada desteğin devamını sağlamak için siteyi stiller ve JavaScript olmadan oluşturacağız.
Saha yeteneklerine sahip çip üzerinde laboratuvar sistemleri, hızlı ve doğru teşhis potansiyeli sunar ve biyomedikal ekipmanın ve eğitimli profesyonellerin bulunmadığı, kaynakların kısıtlı olduğu ortamlarda faydalıdır.Bununla birlikte, çok işlevli dağıtım, talep üzerine serbest bırakma, güvenilir performans ve reaktiflerin uzun süreli saklanması için gerekli tüm özelliklere aynı anda sahip olan bir bakım noktası test sistemi oluşturmak büyük bir zorluk olmaya devam ediyor.Burada, sıvıları herhangi bir yönde manipüle edebilen, uygulanan hava basıncına hassas ve orantılı tepki verebilen, ani hareketlere ve titreşimlere karşı stabil kalabilen, kolla çalıştırılan bir mikro hareket anahtarı teknolojisini anlatıyoruz.Teknolojiye dayalı olarak, reaktif ekleme, karıştırma ve reaksiyon fonksiyonlarını tek bir süreçte birleştiren ve 18 hastadan alınan tüm klinik nazal numuneler için "numune-cevap-çıkış" performansını gerçekleştiren bir polimeraz zincir reaksiyon sisteminin geliştirilmesini de açıklıyoruz. Grip ve 18 bireysel kontrol, standart polimeraz zincir reaksiyonuyla floresans yoğunluğu açısından iyi bir uyum içindedir (Pearson katsayıları > 0,9).Teknolojiye dayanarak, aynı zamanda, 18 hastadan alınan tüm klinik nazal numuneler için "örnek-yanıt-çıkış" performansını gerçekleştiren, reaktif ekleme, karıştırma ve reaksiyon fonksiyonlarını tek bir süreçte birleştiren bir polimeraz zincir reaksiyon sisteminin geliştirilmesini de açıklıyoruz. Grip ve 18 bireysel kontrol ile, standart polimeraz zincir reaksiyonuyla floresans yoğunluğu açısından iyi bir uyum içinde (Pearson katsayıları > 0,9).Основываясь на этой технологии, мы также описываем разработку системы полимеразной цепной реакции, которая объед иняет функции введения реагентов, смешивания и одном процессе, что обеспечивает выполнение «образец-в-отв ет-выход» для всех клинических образцов veз носа от 18 пациентов с Грипп ve 18 отдельных conтролей, в хорошем соответствии интенсивности флуоресценции стандартной полимеразной цепной ре акцией (коэффициенты Пирсона> 0,9).Bu teknolojiye dayanarak, enjeksiyon, karıştırma ve reaksiyona girme işlevlerini tek bir işlemde birleştiren ve 18 influenza hastasından alınan tüm klinik nazal numuneler için yanıt olarak numune almayı mümkün kılan bir polimeraz zincir reaksiyon sisteminin geliştirilmesini de açıklıyoruz.ve 18 ayrı kontrol, standart polimeraz zincir reaksiyonu floresans yoğunluğuyla iyi uyum içindedir (Pearson katsayıları > 0,9).Bu teknolojiye dayanarak, aynı zamanda 18 numune içi nazal hasta numunesinden tüm klinik nazal numuneleri analiz etmek için reaktif enjeksiyonu, karıştırma ve reaksiyon fonksiyonlarını entegre eden bir polimeraz zincir reaksiyon sisteminin geliştirilmesini de açıklıyoruz. Grip ve 18 ayrı kontrol, floresans yoğunluğu eşleşti standart polimeraz zincir reaksiyonuyla iyi (Pearson katsayısı > 0,9).Önerilen platform, biyomedikal analizin güvenilir otomasyonunu garanti eder ve böylece bir dizi hasta başı test cihazının ticarileşmesini hızlandırabilir.
Milyonlarca insanın hayatına mal olan 2020 COVİD-19 salgını gibi ortaya çıkan insan hastalıkları, küresel sağlık ve insan uygarlığı için ciddi bir tehdit oluşturmaktadır1.Hastalıkların erken, hızlı ve doğru tespiti, virüsün yayılmasını kontrol etmek ve tedavi sonuçlarını iyileştirmek açısından kritik öneme sahiptir.Test örneklerinin hastanelere veya teşhis kliniklerine gönderildiği ve profesyoneller tarafından yürütüldüğü merkezi laboratuvarlara dayanan temel bir teşhis ekosistemi, şu anda dünya çapında yaklaşık 5,8 milyar insanın, özellikle de kaynakların kısıtlı olduğu ortamlarda yaşayanların erişimini kısıtlıyor.Pahalı biyomedikal ekipmanın ve kalifiye uzmanların bulunmadığı yerler.2. Bu nedenle, klinisyenlere bilinçli teşhis kararları vermeleri için zamanında teşhis bilgisi sağlayabilecek, bakım noktası testi (POCT) özelliğine sahip, ucuz ve kullanıcı dostu bir çip üzerinde laboratuvar sisteminin geliştirilmesine acil bir ihtiyaç vardır. .ve tedavi 3.
Dünya Sağlık Örgütü (WHO) yönergeleri, ideal bir POCT'nin uygun maliyetli, kullanıcı dostu (minimum eğitimle kullanımı kolay), doğru (yanlış negatiflerden veya yanlış pozitiflerden kaçınan), hızlı ve güvenilir (iyi tekrarlanabilirlik özellikleri sağlamalı) ve güvenilir olması gerektiğini belirtmektedir. teslim edilebilir (uzun süreli depolamaya uygun ve son kullanıcılar tarafından kolaylıkla temin edilebilir)4.Bu gereklilikleri karşılamak için POCT sistemleri aşağıdaki özellikleri sağlamalıdır: manuel müdahaleyi azaltmak için çok yönlü dozaj, doğru test sonuçları için reaktif aktarımını ölçeğe göre isteğe bağlı olarak serbest bırakma ve çevresel titreşime dayanacak güvenilir performans.Şu anda en yaygın olarak kullanılan POCT cihazı, çok küçük miktarda numuneyi ileri doğru iten, önceden hareketsizleştirilmiş reaktiflerle kılcal kuvvetle reaksiyona giren birkaç gözenekli nitroselüloz membran katmanından oluşan yanal akış şerididir5,6.Akış şeridi tabanlı POCT cihazları, düşük maliyet, kullanım kolaylığı ve hızlı sonuç avantajına sahip olsa da, çok aşamalı analizlere ihtiyaç duymadan yalnızca biyolojik testler (örn. glukoz testleri7,8 ve gebelik testleri9,10) için kullanılabilir.reaksiyonlar (örn. birden fazla reaktifin yüklenmesi, karıştırma, çoğullama).Ek olarak, sıvı hareketini kontrol eden itici güçler (yani kılcal kuvvetler), özellikle partiler arasında iyi bir tutarlılık sağlamaz, bu da tekrarlanabilirliğin zayıf olmasına11 neden olur ve yanal akış bantlarını öncelikle iyi tespit için faydalı hale getirir12,13.
Mikro ve nano ölçekte genişletilmiş üretim yetenekleri, niceliksel ölçümler için mikroakışkan POCT cihazlarının geliştirilmesi için fırsatlar yaratmıştır14,15,16,17.Arayüzün (18, 19) özelliklerinin ve kanalların (20, 21, 22) geometrisinin ayarlanmasıyla bu cihazların kılcal kuvveti ve akış hızı kontrol edilebilir.Bununla birlikte, özellikle yüksek oranda ıslatılmış sıvılar için güvenilirlikleri, imalat hataları, malzeme kusurları ve çevresel titreşimlere karşı hassasiyet nedeniyle kabul edilemez olmaya devam etmektedir.Ayrıca sıvı-gaz arayüzünde kılcal bir akış oluşturulduğundan, özellikle mikroakışkan kanalın sıvıyla doldurulmasından sonra ilave bir akış sağlanamaz.Bu nedenle, daha karmaşık algılama için numune enjeksiyonunun birkaç adımının gerçekleştirilmesi gerekir24,25.
Mikroakışkan cihazlar arasında santrifüjlü mikroakışkan cihazlar şu anda POCT26,27 için en iyi çözümlerden biridir.Tahrik mekanizması, tahrik kuvvetinin dönme hızının ayarlanmasıyla kontrol edilebilmesi açısından avantajlıdır.Ancak dezavantajı merkezkaç kuvvetinin her zaman cihazın dış kenarına doğru yönelmesidir, bu da daha karmaşık analizler için gereken çok adımlı reaksiyonların uygulanmasını zorlaştırır.Her ne kadar çok işlevli dozajlama için merkezkaç kuvvetine ek olarak ek itici güçler (örn. kılcal damarlar 28, 29 ve diğer birçok 30, 31, 32, 33, 34, 35) uygulansa da, bu ek kuvvetler genellikle normal olduğundan öngörülemeyen sıvı transferi yine de meydana gelebilir. merkezkaç kuvvetinden daha düşük büyüklüktedir, bu da onları yalnızca küçük çalışma aralıklarında etkili kılar veya talep üzerine sıvı salınımıyla sağlanamaz.Santrifüj kinetik yöntemler 36, 37, 38, termopnömatik yöntemler 39 ve aktif pnömatik yöntemler 40 gibi santrifüj mikroakışkanlara pnömatik manipülasyonların dahil edilmesinin çekici bir alternatif olduğu kanıtlanmıştır.Karşıt dinamik yaklaşımla, hem harici hem de dahili etki için cihaza ek bir boşluk ve bağlantı mikro kanalları entegre edilmiştir, ancak pompalama verimliliği (%75 ila %90 aralığında) büyük ölçüde pompalama çevrimi sayısına ve viskoziteye bağlıdır. sıvının.Termopnömatik yöntemde, lateks membran ve sıvı transfer odası, sıkışan hava hacmi ısıtıldığında veya soğutulduğunda girişi kapatmak veya yeniden açmak için özel olarak tasarlanmıştır.Bununla birlikte, ısıtma/soğutma kurulumu yavaş tepki problemlerine neden olur ve ısıya duyarlı analizlerde (örn. polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) amplifikasyonu) kullanımını sınırlar.Aktif bir pnömatik yaklaşımla, pozitif basıncın eş zamanlı uygulanması ve yüksek hızlı motorlar tarafından tam olarak eşleştirilmiş dönüş hızları sayesinde isteğe bağlı serbest bırakma ve içe doğru hareket elde edilir.Yalnızca pnömatik aktüatörleri (pozitif basınç 41, 42 veya negatif basınç 43) ve normalde kapalı valf tasarımlarını kullanan başka başarılı yaklaşımlar da vardır.Pnömatik haznede art arda basınç uygulanarak, sıvı peristaltik olarak ileri doğru pompalanır ve normalde kapalı olan valf, peristalsis nedeniyle sıvının geri akışını önleyerek karmaşık sıvı operasyonlarını gerçekleştirir.Ancak şu anda tek bir POCT cihazında çok işlevli dağıtım, talep üzerine serbest bırakma, güvenilir performans, uzun süreli depolama, yüksek viskoziteli sıvıların taşınması dahil olmak üzere karmaşık sıvı işlemlerini gerçekleştirebilen yalnızca sınırlı sayıda mikroakışkan teknolojisi bulunmaktadır. ve uygun maliyetli üretim.Hepsi aynı anda.Çok adımlı işlevsel operasyonun eksikliği, Cepheid, Binx, Visby, Cobas Liat ve Rhonda gibi yalnızca birkaç ticari POCT ürününün bugüne kadar açık pazarda başarılı bir şekilde tanıtılmasının nedenlerinden biri olabilir.
Bu yazıda, yeşil halka mikro anahtar teknolojisine (FAST) dayanan pnömatik bir mikroakışkan aktüatör öneriyoruz.FAST, mikrolitreden mililitreye kadar geniş bir reaktif yelpazesi için gerekli tüm özellikleri aynı anda birleştirir.FAST elastik membranlardan, kollardan ve bloklardan oluşur.Hava basıncı uygulanmadan membranlar, kollar ve bloklar sıkıca kapatılarak içindeki sıvının uzun süre saklanabilmesi sağlanır.Uygun basınç uygulandığında ve kolun uzunluğuna ayarlandığında diyafram genişler ve kolu açık konuma iterek sıvının geçmesine izin verir.Bu, sıvıların kademeli, eş zamanlı, sıralı veya seçici bir şekilde çok işlevli ölçümüne olanak sağlar.
İnfluenza A ve B virüslerinin (IAV ve IBV) saptanmasına yönelik numune içinde yanıt sonuçları oluşturmak için FAST'ı kullanan bir PCR sistemi geliştirdik.102 kopya/mL'lik bir alt tespit sınırına (LOD) ulaştık, multipleks tahlilimiz IAV ve IBV için spesifiklik gösterdi ve influenza virüsü patotiplenmesine izin verdi.18 hasta ve 18 sağlıklı bireyden alınan nazal sürüntü numunesi kullanılarak yapılan klinik test sonuçları, floresan yoğunluğu açısından standart RT-PCR ile iyi bir uyum göstermektedir (Pearson katsayıları > 0,9).18 hasta ve 18 sağlıklı bireyden alınan nazal sürüntü numunesi kullanılarak yapılan klinik test sonuçları, floresan yoğunluğu açısından standart RT-PCR ile iyi bir uyum göstermektedir (Pearson katsayıları > 0,9).18 çocuk ve 18 çocuk arasında en iyi klinik yönetimi азывают хорошее соответствие интенсивности флуоресценции стандартной ОТ-ПЦР (коэффициенты Пирсона > 0,9).18 hasta ve 18 sağlıklı bireyden alınan nazal sürüntü örneğinin kullanıldığı klinik deneylerin sonuçları, standart RT-PCR'nin floresans yoğunluğu arasında iyi bir uyum olduğunu göstermektedir (Pearson katsayıları > 0,9).0,9) 18 gün ve 18 yıl boyunca en iyi klinik yönetimi показали хорошее соответствие между интенсивностью флуоресценции ve стандартной ОТ-ПЦР (Пирсона) > 0,9).18 hasta ve 18 sağlıklı bireyden alınan nazal sürüntü örneklerinin kullanıldığı klinik deneylerin sonuçları, floresans yoğunluğu ile standart RT-PCR arasında iyi bir uyum olduğunu gösterdi (Pearson katsayısı > 0,9).Bir FAST-POCT cihazının tahmini malzeme maliyeti yaklaşık 1 ABD Dolarıdır (Ek Tablo 1) ve büyük ölçekli üretim yöntemleri (örn. enjeksiyonlu kalıplama) kullanılarak daha da azaltılabilir.Aslında FAST tabanlı POCT cihazları, Dünya Sağlık Örgütü'nün zorunlu kıldığı tüm gerekli özelliklere sahiptir ve POCT sistemlerinin omurgasını oluşturan plazma termal döngü44, amplifikasyon içermeyen immünolojik testler45 ve nanobody işlevselleştirme testleri46 gibi yeni biyokimyasal test yöntemleriyle uyumludur.olasılık.
Şek.Şekil 1a, dört sıvı bölmesinden oluşan FAST-POCT platformunun yapısını göstermektedir: bir ön depolama bölmesi, bir karıştırma bölmesi, bir reaksiyon bölmesi ve bir atık bölmesi.Sıvı akış kontrolünün anahtarı, ön depolama bölmesinde ve karıştırma bölmesinde bulunan FAST tasarımıdır (elastik membranlar, kollar ve bloklardan oluşur).Pnömatik olarak çalıştırılan bir yöntem olarak FAST tasarımı, kapalı/açık anahtarlama, çok yönlü dozaj, isteğe bağlı sıvı tahliyesi, güvenilir çalışma (örn. çevresel titreşime karşı duyarsızlık) ve uzun süreli depolama dahil olmak üzere hassas sıvı akışı kontrolü sağlar.FAST-POCT platformu dört katmandan oluşur: Şekil 1b'de büyütülmüş bir görünümde gösterildiği gibi bir destek katmanı, bir elastik film katmanı, bir plastik film katmanı ve bir kaplama katmanı (ayrıca Ek Şekiller S1 ve S2'de ayrıntılı olarak gösterilmiştir) ).Tüm kanallar ve sıvı taşıma odaları (ön depolama ve reaksiyon odaları gibi), kalınlığı 0,2 mm'den (en ince kısım) 5 mm'ye kadar değişen PLA (polilaktik asit) substratlarına gömülüdür.Elastik film malzemesi, "ince kalınlığı" ve düşük elastiklik modülü (yaklaşık 2,25 MPa47) nedeniyle hava basıncı uygulandığında kolayca genişleyen 300 µm kalınlığında bir PDMS'dir.Polietilen film tabakası, elastik filmi hava basıncı nedeniyle aşırı deformasyondan korumak için 100 µm kalınlığında polietilen tereftalattan (PET) yapılmıştır.Bölmelere karşılık gelen alt katman, sıvı akışını kontrol etmek için kapak katmanına (PLA'dan yapılmış) menteşelerle bağlanan kollara sahiptir.Elastik film, çift taraflı yapışkan bant (ARseal 90880) kullanılarak destek katmanına yapıştırıldı ve plastik bir filmle kaplandı.Kapak katmanında bir T-klips tasarımı kullanılarak bir alt tabaka üzerine üç katman birleştirildi.T-kelepçenin iki bacak arasında bir boşluğu vardır.Klips oluğa yerleştirildiğinde, iki bacak hafifçe büküldü, ardından orijinal durumuna geri döndü ve oluktan geçerken kapağı ve desteği sıkıca bağladı (Ek Şekil S1).Dört katman daha sonra konektörler kullanılarak birleştirilir.
FAST'ın çeşitli fonksiyonel bölmelerini ve özelliklerini gösteren platformun şematik diyagramı.b FAST-POCT platformunun büyütülmüş diyagramı.c ABD çeyrek dolarlık madalyonun yanındaki platformun fotoğrafı.
FAST-POCT platformunun çalışma mekanizması Şekil 2'de gösterilmektedir. Temel bileşenler, taban katmanındaki bloklar ve kapak katmanındaki menteşelerdir; bu, dört katman bir T şekli kullanılarak birleştirildiğinde girişimli bir tasarıma neden olur. .Hava basıncı uygulanmadığında (şekil 2a), sıkı geçme menteşenin bükülmesine ve deforme olmasına neden olur ve elastik filmi bloğa doğru bastırmak için kol aracılığıyla bir sızdırmazlık kuvveti uygulanır ve conta boşluğundaki sıvı tanımlanır. mühürlü bir durum olarak.Bu durumda, Şekil 2a'daki yandan görünümde gösterildiği gibi kolun dışarı doğru büküldüğüne dikkat edilmelidir.Hava verildiğinde (Şekil 2b), elastik membran kapağa doğru genişler ve kolu yukarı iter, böylece sıvının açık durum olarak tanımlanan bir sonraki odaya akması için kol ile blok arasında bir boşluk açılır. .Hava basıncının serbest bırakılmasından sonra kol orijinal konumuna dönebilir ve menteşenin esnekliği nedeniyle sıkı kalabilir.Kol hareketlerinin videoları ek film S1'de sunulmaktadır.
A. Kapalıyken şematik diyagram ve fotoğraflar.Basınç olmadığında, kol membranı bloğa doğru bastırır ve sıvı kapatılır.b. İyi durumda.Basınç uygulandığında membran genişler ve kolu yukarı iter, böylece kanal açılır ve sıvı akabilir.c Kritik basıncın karakteristik boyutunu belirleyin.Karakteristik boyutlar arasında kolun uzunluğu (L), kaydırıcı ile menteşe arasındaki mesafe (l) ve kol çıkıntısının kalınlığı (t) yer alır.Fs, B gaz kelebeği noktasındaki sıkıştırma kuvvetidir. q, kol üzerindeki eşit dağıtılmış yüktür.Tx*, menteşeli kol tarafından geliştirilen torku temsil eder.Kritik basınç, kolu kaldırmak ve sıvı akışını sağlamak için gereken basınçtır.d Kritik basınç ile eleman boyutu arasındaki ilişkinin teorik ve deneysel sonuçları.n = 6 bağımsız deney yapıldı ve veriler ± standart sapma olarak gösterildi.Ham veriler ham veri dosyaları olarak sunulur.
Boşluğun açıldığı kritik basınç Pc'nin geometrik parametrelere (örneğin L kolun uzunluğu, l blok ile blok arasındaki mesafe) bağımlılığını analiz etmek için kiriş teorisine dayalı analitik bir model geliştirilmiştir. menteşe, S koldur Sıvı ile temas alanı t, Şekil 2c'de gösterildiği gibi kol çıkıntısının kalınlığıdır.Ek Notlar ve Ek Şekil S3'te ayrıntılı olarak açıklandığı gibi, boşluk \({P_{c}\ge \frac{2{F} _{s}l}{SL}\) olduğunda açılır; burada Fs torktur \ ({T_{x}^{\ast}(={F_{s}l)\) girişimli geçmeyle ilişkili kuvvetleri ortadan kaldırır ve menteşenin bükülmesine neden olur.Deneysel yanıt ve analitik model iyi bir uyum göstermektedir (Şekil 2d), bu durum, klasik ışın modeliyle kolayca açıklanabilen, kritik basınç Pc'nin t/l artışı ve L azalmasıyla arttığını göstermektedir; yani tork t/Kaldırma ile artar. .Dolayısıyla teorik analizimiz, FAST-POCT platformunun tasarımı için önemli bir temel sağlayan kol uzunluğu L ve t/l oranının ayarlanmasıyla kritik basıncın etkili bir şekilde kontrol edilebileceğini açıkça göstermektedir.
FAST-POCT platformu, başarılı POCT'nin en önemli özelliği olan, sıvıların herhangi bir yönde ve herhangi bir sırayla (kademeli, eşzamanlı, sıralı) veya seçici çok kanallı olarak akabildiği çok işlevli dağıtım (Şekil 3a'da ek ve deney ile gösterilmiştir) sağlar. dağıtım.– dozaj fonksiyonu.Şek.Şekil 3a(i), iki veya daha fazla haznenin çeşitli reaktanları ayırmak için bloklar ve açık ve kapalı durumları kontrol etmek için bir kol kullanılarak basamaklandırıldığı basamaklı bir dozlama modunu gösterir.Basınç uygulandığında sıvı üst bölmeden alt bölmeye kademeli bir şekilde akar.Kademeli bölmelerin ıslak kimyasallarla veya liyofilize tozlar gibi kuru kimyasallarla doldurulabileceğine dikkat edilmelidir.Şekil 3a(i)'deki deneyde, üst bölmeden gelen kırmızı mürekkep, mavi boya tozu (bakır sülfat) ile birlikte ikinci bölmeye akar ve alt bölmeye ulaştığında koyu maviye döner.Ayrıca pompalanan akışkanın kontrol basıncını da gösterir.Benzer şekilde, bir kol iki hazneye bağlandığında, şekil 2'de gösterildiği gibi eşzamanlı enjeksiyon modu haline gelir.Şekil 3a(ii)'de basınç uygulandığında sıvı iki veya daha fazla hazneye eşit şekilde dağıtılabilmektedir.Kritik basınç kolun uzunluğuna bağlı olduğundan, kolun uzunluğu şekil 2'de gösterildiği gibi sıralı bir enjeksiyon deseni elde edecek şekilde ayarlanabilir.3a(iii).Uzun bir kol (kritik basınç Pc_long) B bölmesine ve kısa bir kol (kritik basınç Pc_short > Pc_long) A bölmesine bağlandı. P1 basıncı (Pc_long < P1 < Pc_short) uygulandığında yalnızca kırmızı sıvı oluştu. B bölmesine akabilir ve basınç P2'ye (> Pc_short) yükseltildiğinde mavi sıvı A bölmesine akabilir. Bu sıralı enjeksiyon modu, başarılı bir POCT için kritik olan, ilgili bölmelere sırayla aktarılan farklı sıvılar için geçerlidir. cihaz.Uzun bir kol (kritik basınç Pc_long) B bölmesine ve kısa bir kol (kritik basınç Pc_short > Pc_long) A bölmesine bağlandı. P1 basıncı (Pc_long < P1 < Pc_short) uygulandığında yalnızca kırmızı sıvı oluştu. B bölmesine akabilir ve basınç P2'ye (> Pc_short) yükseltildiğinde mavi sıvı A bölmesine akabilir. Bu sıralı enjeksiyon modu, başarılı bir POCT için kritik olan, ilgili bölmelere sırayla aktarılan farklı sıvılar için geçerlidir. cihaz.Длинный рычаг (с критическим давлением Pc_long) был соединен с камерой B, а короткий рычаг (с критическим давлением Pc_sh) ort > Pc_long) был соединен с камерой A. При приложении давления P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) только жидкость, выделенная красным т ечь в B kamerası ve P2'ye (> Pc_short) bağlı olarak, A kamerasında değişiklik yapılabilir. ного впрыска применяется к различным жидкостям, последовательно перемещаемым в соответствующие kameralar, что имеет POCT'u kontrol etmek için kontrol edin.Uzun bir kol (kritik basınç Pc_long) B bölmesine bağlandı ve kısa bir kol (kritik basınç Pc_short > Pc_long) A bölmesine bağlandı. P1 basıncı (Pc_long < P1 < Pc_short) uygulandığında yalnızca sıvı vurgulanır kırmızı renk B bölmesine akabilir ve basınç P2'ye (> Pc_short) artırıldığında mavi sıvı A bölmesine akabilir. Bu sıralı enjeksiyon modu, ilgili bölmelere sırayla aktarılan farklı akışkanlara uygulanır ve bu kritiktir Başarılı POCT için.cihaz. Длинный рычаг (критическое давление Pc_long) соединен с камерой B, а короткий рычаг (критическое давление Pc_short > Pc_long) инен с kameraroy A.Uzun kol (kritik basınç Pc_long) B bölmesine ve kısa kol (kritik basınç Pc_short > Pc_long) A bölmesine bağlanır.P1'in (Pc_long < P1 < Pc_short) B'deki kullanımı, bir sonraki gün için en uygun olanıdır. до P2 (> Pc_short) в kamerada A может поступать синяя жидкость.P1 basıncı (Pc_long < P1 < Pc_short) uygulandığında, B bölmesine yalnızca kırmızı sıvı girebilir ve basınç P2'ye (> Pc_short) artırıldığında, A bölmesine mavi sıvı girebilir. Bu sıralı enjeksiyon modu, B bölmesine sıralı transfer için uygundur. POCT cihazının başarılı çalışması için kritik olan ilgili odalara çeşitli sıvılar.Şekil 3a(iv), ana bölmenin sırasıyla A bölmesine ve B bölmesine bağlanan kısa (kritik basınç Pc_short ile) ve uzun bir kolun (kritik basınç Pc_long < Pc_short) bulunduğu seçici enjeksiyon modunu göstermektedir. Sıvının A bölmesine aktarılması için öncelikle cihaza aynı anda P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) ve P1 + P2 > Pc_short ile P2 (P2 > P1) basıncı uygulandı.Şekil 3a(iv), ana bölmenin sırasıyla A bölmesine ve B bölmesine bağlanan kısa (kritik basınç Pc_short ile) ve uzun bir kolun (kritik basınç Pc_long < Pc_short) bulunduğu seçici enjeksiyon modunu göstermektedir. Sıvının A bölmesine aktarılması için öncelikle cihaza aynı anda P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) ve P1 + P2 > Pc_short ile P2 (P2 > P1) basıncı uygulandı.Şek.3а(iv) показан режим селективного впрыска, при котором основная камера имела короткий (с критическим давлением Pc_short) ve дли нный рычаг (с критическим давлением Pc_long < Pc_short), которые дополнительно соединялись с камерой A ve камерой B соответственно.Şekil 3a(iv), ana bölmenin sırasıyla A bölmesine ve B bölmesine ek olarak bağlanan bir kısa (kritik basınç Pc_short ile) ve bir uzun kola (kritik basınç Pc_long < Pc_short ile) sahip olduğu seçici enjeksiyon modunu göstermektedir.к другому воздушному каналу, соединенному с kamera B. Чтобы сначала передать в камеру A, к устройству одновр aynı şekilde P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) ve P2 (P2 > P1), yani P1 + P2 > Pc_short'u da seçebilirsiniz.B bölmesine bağlı başka bir hava kanalına. Sıvıyı ilk olarak A bölmesine aktarmak için, P1 + P2 > Pc_short olmak üzere cihaza P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) ve P2 (P2 > P1) basınçları aynı anda uygulandı. 3а(iv) показан режим селективного впрыска, когда основная камера имеет короткий стержень (с критическим давлением Pc_short) ve длинный стержень (с критическим давлением Pc_long < Pc_short), соединенные с камерой A ve камерой B соответственно, ve в дополнение к другому воздушному kanal, B ile iletişim kurmak.Şekil 3a(iv), ana bölmenin sırasıyla A bölmesine ve B bölmesine bağlı kısa bir gövdeye (kritik basınç Pc_short) ve uzun bir gövdeye (kritik basınç Pc_long < Pc_short) sahip olduğu ve başka bir hava geçişine ek olarak seçici enjeksiyon modunu gösterir. B odasına bağlı.Böylece P2, sıvının B bölmesine girmesini önler;bu arada, P1 + P2 toplam basıncı, A bölmesine sıvı akışını sağlamak üzere A bölmesine bağlı daha kısa kolu etkinleştirmek için kritik basıncı aştı. Daha sonra, B bölmesinin doldurulması gerektiğinde yalnızca P1 uygulamamız gerekir (Pc_long < P1 < Pc_short) ana haznede uzun kolu etkinleştirerek sıvının B haznesine akmasını sağlar. t = 3 s'den 9 s'ye kadar A haznesindeki sıvının haznede artarken sabit kaldığı açıkça görülmektedir. P1 basıncı uygulandığında B.bu arada, P1 + P2 toplam basıncı, A bölmesine sıvı akışını sağlamak üzere A bölmesine bağlı daha kısa kolu etkinleştirmek için kritik basıncı aştı. Daha sonra, B bölmesinin doldurulması gerektiğinde yalnızca P1 uygulamamız gerekir (Pc_long < P1 < Pc_short) ana haznede uzun kolu etkinleştirerek sıvının B haznesine akmasını sağlar. t = 3 s'den 9 s'ye kadar A haznesindeki sıvının haznede artarken sabit kaldığı açıkça görülmektedir. P1 basıncı uygulandığında B.Bu durumda, P1 + P2'nin kredi kartıyla birlikte kullanılması, şu anda geçerli olan bir kredi kartıdır. нный с kamera A, чтобы жидкости течь в kamera A. Затем, когда требуется заполнить камеру B, нам нужно ько применить P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) ) основной камере, чтобы активировать длинный рычаг и дать жидкости течь в камеру B. Можно ясно наблюдать, в период с t = 3 с до 9 с жидкость в камере A оставалась постоянной, в то время как в время как в увеличивалась.Bu arada, P1 + P2 toplam basıncı, sıvının A bölmesine akmasını sağlamak üzere A bölmesine bağlı daha kısa bir kolu harekete geçirmek için kritik basıncı aşmıştır. Daha sonra B bölmesinin doldurulması gerektiğinde yalnızca P1 uygulamamız gerekir (Pc_long < P1) Uzun kolu aktive etmek ve sıvının B bölmesine akmasını sağlamak için ana bölmedeki < Pc_short ) . T = 3 s ile 9 s arasında A bölmesindeki sıvının sabit kalırken bölmede arttığı açıkça görülmektedir.P1 basıncı uygulandığında B.Aynı zamanda, P1 + P2 toplam basıncı kritik basıncı aşarak daha kısa olan A bölmesini bağlayan kolu harekete geçirir ve sıvının A bölmesine akmasına izin verir.A bölmesini doldurma zamanı geldiğinde, ana bölmeye P1'i ve ikincil bölmeye P2'yi uyguluyoruz.Bu şekilde akış davranışı, A ve B kameraları arasında seçici olarak değiştirilebilir. Dört çok işlevli dağıtım modunun akış davranışı, ek S2 filminde bulunabilir.
Çok işlevli atamanın bir örneği, yani (i) basamaklı, (ii) eşzamanlı, (iii) sıralı ve (iv) seçici atama.Eğriler bu dört dağıtım modunun iş akışını ve parametrelerini temsil eder.b Deiyonize su ve etanolde uzun süreli depolama testlerinin sonuçları.n = 5 bağımsız deney yapıldı ve veriler ± sd c olarak gösterildi.FAST cihazı ve kılcal valf (CV) cihazı (i) statik ve (ii) titreşimli durumdayken stabilite testi gösterileri.(iii) Çeşitli açısal frekanslarda FAST ve CV cihazları için hacim ve zaman.d (i) FAST cihazı ve (ii) CV cihazı için test sonuçlarının talep üzerine yayınlanması.(iii) Aralıklı basınç modunu kullanan FAST ve CV cihazları için hacim ve zaman arasındaki ilişki.Tüm ölçek çubukları, 1 cm.Ham veriler ham veri dosyaları olarak sağlanır.
Reaktiflerin uzun süreli saklanması, başarılı bir POCT cihazının eğitimsiz personelin birden fazla reaktifi kullanmasına olanak sağlayacak bir diğer önemli özelliğidir.Pek çok teknoloji uzun vadeli depolama potansiyelini göstermiş olsa da (örneğin, 35 mikro dağıtıcı, 48 kabarcıklı paket ve 49 çubuk paket), paketi barındırmak için özel bir alıcı bölme gereklidir, bu da maliyeti ve karmaşıklığı artırır;ayrıca bu depolama mekanizmaları isteğe bağlı dağıtıma izin vermez ve ambalajdaki artıklar nedeniyle reaktiflerin israfına neden olur.Uzun süreli depolama kapasitesi, hafif pürüzlülüğü ve gaz geçirgenliğine karşı direnci nedeniyle CNC ile işlenmiş PMMA malzemesi kullanılarak hızlandırılmış bir ömür testi yapılarak doğrulandı (Ek Şekil S5).Test aparatı, 9 gün boyunca 65°C'de deiyonize su (deiyonize su) ve %70 etanol (uçucu reaktifleri simüle eden) ile dolduruldu.Hem deiyonize su hem de etanol, yukarıdan erişimi engellemek için alüminyum folyo kullanılarak depolandı.Gerçek zamanlı eşdeğeri hesaplamak için literatürde50,51 bildirilen Arrhenius denklemi ve penetrasyon aktivasyon enerjisi kullanıldı.Şek.Şekil 3b, 65°C'de 9 gün boyunca saklanan 5 numunenin ortalama ağırlık kaybı sonuçlarını gösterir; bu, 23°C'de 2 yıl boyunca deiyonize su için %0,30'a ve %70 etanol için %0,72'ye eşdeğerdir.
Şek.Şekil 3c titreşim testini göstermektedir.Kılcal valf (CV), mevcut POCT28,29 cihazları arasında en popüler sıvı taşıma yöntemi olduğundan, karşılaştırma için 300 µm genişliğinde ve 200 µm derinliğinde bir CV cihazı kullanıldı.Her iki cihaz da sabit kaldığında kanalın ani genişlemesi nedeniyle FAST-POCT platformundaki akışkanın sızdırmazlığı sağladığı ve CV cihazındaki akışkanın kilitlendiği, bunun da kılcal kuvvetleri azalttığı görülmektedir.Bununla birlikte, yörünge vibratörünün açısal frekansı arttıkça, FAST-POCT platformundaki sıvı kapalı kalır, ancak CV cihazındaki sıvı alt odaya akar (ayrıca bkz. Ek Film S3).Bu, FAST-POCT platformunun deforme olabilen menteşelerinin, bölmedeki sıvıyı sıkıca kapatmak için modüle güçlü bir mekanik kuvvet uygulayabildiğini göstermektedir.Ancak CV cihazlarda katı, hava ve sıvı fazlar arasındaki denge nedeniyle sıvı tutulur, bu da kararsızlık yaratır ve titreşimler dengeyi bozarak beklenmedik akış davranışına neden olabilir.FAST-POCT platformunun avantajı, güvenilir işlevsellik sağlaması ve genellikle teslimat ve çalıştırma sırasında meydana gelen titreşimlerin varlığında arızaları önlemesidir.
FAST-POCT platformunun bir diğer önemli özelliği, niceliksel analiz için temel bir gereklilik olan talep üzerine yayınlanmasıdır.Şek.3d, FAST-POCT platformunun ve CV cihazının isteğe bağlı sürümünü karşılaştırmaktadır.Şek.Şekil 3d(iii)'de FAST cihazının basınç sinyaline hızlı tepki verdiğini görüyoruz.FAST-POCT platformuna basınç uygulandığında sıvı aktı, basınç bırakıldığında akış hemen durdu (Şekil 3d(i)).Bu hareket, kolu bloğa doğru bastırarak odayı kapatan menteşenin hızlı elastik geri dönüşüyle açıklanabilir.Bununla birlikte, sıvı CV cihazında akmaya devam etti ve sonunda basınç serbest bırakıldıktan sonra yaklaşık 100 ul'lik beklenmedik bir sıvı hacmiyle sonuçlandı (Şekil 3d(ii) ve Ek Film S4).Bu, ilk enjeksiyondan sonra CV'nin tamamen ıslanması üzerine kılcal sabitleme etkisinin ortadan kalkmasıyla açıklanabilir.
Farklı ıslanabilirlik ve viskoziteye sahip sıvıları aynı cihazda kullanma yeteneği, POCT uygulamaları için bir zorluk olmaya devam etmektedir.Zayıf ıslanabilirlik, kanallarda sızıntılara veya diğer beklenmeyen akış davranışlarına neden olabilir ve yüksek viskoziteli sıvıların hazırlanması için genellikle girdap karıştırıcılar, santrifüjler ve filtreler gibi yardımcı ekipmanlara ihtiyaç duyulur52.Kritik basınç ile akışkan özellikleri (geniş bir ıslanabilirlik ve viskozite aralığıyla) arasındaki ilişkiyi test ettik.Sonuçlar Tablo 1 ve Video S5'te gösterilmektedir.Farklı ıslanabilirlik ve viskoziteye sahip sıvıların haznede kapatılabileceği ve basınç uygulandığında viskozitesi 5500 cP'ye kadar olan sıvıların bile bitişik hazneye aktarılabileceği, böylece yüksek viskozite (yani balgam, solunum yolu hastalıklarının teşhisinde kullanılan çok yapışkan bir örnek).
Yukarıdaki çok işlevli dağıtım cihazlarını birleştirerek geniş bir yelpazede FAST tabanlı POCT cihazları geliştirilebilir.Şekil 1'de bir örnek gösterilmektedir. Tesis, bir ön depolama odası, bir karıştırma odası, bir reaksiyon odası ve bir atık odası içerir.Reaktifler ön depolama odasında uzun süre saklanabilir ve daha sonra karıştırma odasına boşaltılabilir.Doğru basınçla, karışık reaktanlar seçici olarak bir atık odasına veya bir reaksiyon odasına aktarılabilir.
PCR tespiti, H1N1 ve COVID-19 gibi patojenlerin tespitinde altın standart olduğundan ve birden fazla reaksiyon adımı içerdiğinden, uygulama olarak PCR tespiti için FAST-POCT platformunu kullandık.Şek.Şekil 4, FAST-POCT platformunu kullanan PCR test sürecini göstermektedir.İlk olarak elüsyon reaktifi, manyetik mikro boncuk reaktifi, yıkama solüsyonu A ve yıkama solüsyonu W sırasıyla E, M, W1 ve W2 ön depolama odalarına pipetlendi.RNA adsorpsiyonunun aşamaları şekil 2'de gösterilmektedir.Şekil 4a'da gösterildiği gibi ve aşağıdaki gibidir: (1) P1 basıncı (=0,26 bar) uygulandığında, numune M bölmesine hareket eder ve karıştırma bölmesine boşaltılır.(2) Hava basıncı P2 (= 0,12 bar), karıştırma odasının tabanına bağlanan port A yoluyla sağlanır.Her ne kadar bir dizi karıştırma yöntemi sıvıları POCT platformlarında karıştırma konusundaki potansiyelini göstermiş olsa da (örneğin serpantin karıştırma 53, rastgele karıştırma 54 ve toplu karıştırma 55), bunların karıştırma verimliliği ve etkinliği hala tatmin edici değildir.Sıvıda kabarcıklar oluşturmak için karıştırma odasının tabanına havanın verildiği kabarcık karıştırma yöntemini benimser, ardından güçlü girdap saniyeler içinde tam karıştırma sağlayabilir.Kabarcık karıştırma deneyleri yapıldı ve sonuçlar Ek Şekil S6'da sunuldu.0,10 bar basınç uygulandığında tam karıştırmanın yaklaşık 8 saniye sürdüğü görülmektedir.Basıncın 0,20 bara çıkarılmasıyla karışımın tamamlanması yaklaşık 2 saniyede gerçekleştirilir.Karıştırma verimliliğini hesaplamaya yönelik yöntemler, Yöntemler bölümünde sunulmaktadır.(3) Boncukları çıkarmak için bir rubidyum mıknatısı kullanın, ardından reaktifleri atık odasına taşımak için P3'ü (= 0,17 bar) P portu üzerinden basınçlandırın.Şek.Şekil 4b,c, numunedeki yabancı maddelerin uzaklaştırılmasına yönelik yıkama adımlarını aşağıdaki şekilde göstermektedir: (1) W1 bölmesinden gelen yıkama solüsyonu A, basınçlı karıştırma bölmesine P1 boşaltılır.(2) Daha sonra kabarcık karıştırma işlemini yapın.(3) Yıkama solüsyonu A, atık sıvı bölmesine aktarılır ve karıştırma bölmesindeki mikro boncuklar mıknatıs tarafından dışarı çekilir.Yıkama W (Şekil 4c), yıkama A'ya (Şekil 4b) benzerdi.Her yıkama aşaması A ve W'nin iki kez gerçekleştirildiğine dikkat edilmelidir.Şekil 4d, RNA'nın boncuklardan elüsyonuna yönelik elüsyon adımlarını göstermektedir;elüsyon ve karıştırma ekleme adımları yukarıda açıklanan RNA adsorpsiyonu ve yıkama adımlarıyla aynıdır.Elüsyon reaktifleri P3 ve P4 (=0,23 bar) basınçları altında PCR reaksiyon odasına aktarılırken, PCR reaksiyon odasının kolunu kapatmak için kritik basınca ulaşılır.Benzer şekilde P4 basıncı da atık odasına giden geçidin kapatılmasına yardımcı olur.Böylece tüm elüsyon reaktifleri, multipleks PCR reaksiyonlarını başlatmak için dört PCR reaksiyon odası arasında eşit şekilde dağıtıldı.Yukarıdaki prosedür Ek Film S6'da sunulmaktadır.
RNA adsorpsiyon adımında, numune M girişine verilir ve önceden depolanan boncuk çözeltisiyle birlikte karıştırma odasına enjekte edilir.Granüllerin karıştırılıp çıkarılmasından sonra reaktifler atık haznesine dağıtılır.b ve c yıkama adımlarında, önceden depolanmış çeşitli yıkama reaktiflerini karıştırma odasına ekleyin ve boncukları karıştırıp çıkardıktan sonra reaktifleri atık sıvı bölmesine aktarın.d Elüsyon adımı: Elüsyon reaktiflerinin eklenmesi, karıştırılması ve boncuk ekstraksiyonunun ardından reaktifler PCR reaksiyon odasına aktarılır.Eğriler iş akışını ve çeşitli aşamaların ilgili parametrelerini gösterir.Basınç, bireysel odalara uygulanan basınçtır.Hacim, karıştırma odasındaki sıvının hacmidir.Tüm ölçek çubukları 1 cm'dir.Ham veriler ham veri dosyaları olarak sağlanır.
Bir PCR test prosedürü gerçekleştirildi ve Ek Şekil S7, 20 dakikalık ters transkripsiyon süresi ve 60 dakikalık termal döngü süresi (95 ve 60 ° C) içeren termal profilleri sunar; bir termal döngü 90 saniyedir (Ek Film S7)..FAST-POCT, bir termal döngüyü tamamlamak için geleneksel RT-PCR'ye (bir termal döngü için 180 saniye) kıyasla daha az zaman gerektirir (90 saniye).Bu, mikro PCR reaksiyon odasının yüksek yüzey alanı/hacim oranı ve düşük termal ataletiyle açıklanabilir.Hazne yüzeyi 96,6 mm2 ve hazne hacmi 25 mm3 olup yüzey/hacim oranı yaklaşık 3,86'dır.Ek Şekil S10'da görüldüğü gibi, platformumuzun PCR test alanının arka panelinde PCR odasının tabanını 200 µm kalınlığında yapan bir oluk vardır.Sıcaklık kontrol cihazının ısıtma yüzeyine termal olarak iletken elastik bir ped takılarak test kutusunun arkasıyla sıkı temas sağlanır.Bu, platformun termal ataletini azaltır ve ısıtma/soğutma verimliliğini artırır.Termal döngü sırasında platforma gömülü parafin erir ve PCR reaksiyon odasına akar, reaktif buharlaşmasını ve çevresel kirlenmeyi önlemek için bir sızdırmazlık maddesi görevi görür (bkz. Ek Film S8).
Yukarıda açıklanan tüm PCR tespit işlemleri, programlanmış bir basınç kontrol ünitesi, bir manyetik ekstraksiyon ünitesi, bir sıcaklık kontrol ünitesi ve bir floresan sinyal yakalama ve işleme ünitesinden oluşan özel yapım bir FAST-POCT cihazı kullanılarak tamamen otomatikleştirildi.Dikkat çekici bir şekilde, RNA izolasyonu için FAST-POCT platformunu kullandık ve daha sonra karşılaştırma için FAST-POCT sistemini ve masaüstü PCR sistemini kullanarak PCR reaksiyonları için ekstrakte edilen RNA örneklerini kullandık.Sonuçlar Ek Şekil S8'de gösterilenlerle neredeyse aynıydı.Operatör basit bir görevi yerine getirir: numuneyi M bölmesine sokar ve platformu cihaza yerleştirir.Kantitatif test sonuçları yaklaşık 82 dakika içinde elde edilir.FAST-POCT araçlarına ilişkin ayrıntılı bilgiyi ek şekilde bulabilirsiniz.C9, C10 ve C11.
İnfluenza A (IAV), B (IBV), C (ICV) ve D (IDV) virüslerinin neden olduğu grip, yaygın bir küresel olgudur.Bunlardan IAV ve IBV, dünya nüfusunun %5-15'ini enfekte ederek, yılda 3-5 milyon ağır vakaya ve 290.000-650.000 ölüme neden olan en ağır vakalardan ve mevsimsel salgınlardan sorumludur.Solunum hastalıkları56,57.Morbiditeyi ve buna bağlı ekonomik yükü azaltmak için IAV ve IB'nin erken tanısı önemlidir.Mevcut teşhis teknikleri arasında ters transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonunun (RT-PCR) en duyarlı, spesifik ve doğru (>%99) olduğu kabul edilir58,59.Mevcut teşhis teknikleri arasında ters transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonunun (RT-PCR) en duyarlı, spesifik ve doğru (>%99) olduğu kabul edilir58,59.Среди доступных диагностических методов полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) я наиболее чувствительной, специфичной и точной (> %99)58,59.Mevcut teşhis yöntemleri arasında ters transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonunun (RT-PCR) en duyarlı, spesifik ve doğru (> %99) olduğu kabul edilir58,59. Из доступных диагностических методов полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) считается наиболее чувствительной, специфичной и точной (>%99)58,59.Mevcut teşhis yöntemlerinden ters transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonunun (RT-PCR) en duyarlı, spesifik ve doğru (>%99) olduğu kabul edilir58,59.Bununla birlikte, geleneksel RT-PCR yöntemleri sıvının tekrar tekrar pipetlenmesini, karıştırılmasını, dağıtılmasını ve aktarılmasını gerektirir, bu da kaynakların sınırlı olduğu ortamlarda profesyoneller tarafından kullanımlarını sınırlandırır.Burada, alt tespit limitlerini (LOD) elde etmek amacıyla sırasıyla IAV ve IBV'nin PCR tespiti için FAST-POCT platformu kullanıldı.Ek olarak IAV ve IBV, türler arasında farklı patotipler arasında ayrım yapmak üzere çoğaltılarak genetik analiz için umut verici bir platform ve hastalığı doğru bir şekilde tedavi etme yeteneği sağlanmıştır.
Şek.Şekil 5a, örnek olarak 150 ul saflaştırılmış viral RNA kullanılarak yapılan HAV PCR testinin sonuçlarını gösterir.Şek.Şekil 5a(i), 106 kopya/ml'lik bir HAV konsantrasyonunda floresans yoğunluğunun (ΔRn) 0,830'a ulaşabileceğini ve konsantrasyon 102 kopya/ml'ye düştüğünde ΔRn'nin hala 0,365'e ulaşabileceğini gösterir; bu, bundan daha yüksek bir değere karşılık gelir. boş negatif kontrol grubunun (0,002) yaklaşık 100 kat daha yüksek.Altı bağımsız deneye dayanan nicelik belirleme için, log konsantrasyonu ile IAV'nin döngü eşiği (Ct) (Şekil 5a(ii)), R2 = 0,993, 102-106 kopya/mL arasında değişen doğrusal bir kalibrasyon eğrisi oluşturuldu.sonuçlar geleneksel RT-PCR yöntemleriyle iyi bir uyum içindedir.Şek.Şekil 5a(iii), FAST-POCT platformunun 40 döngüsünden sonra test sonuçlarının floresan görüntülerini gösterir.FAST-POCT platformunun 102 kopya/mL kadar düşük HAV'yi tespit edebildiğini bulduk.Ancak geleneksel yöntemin 102 kopya/mL'lik bir Ct değeri yoktur, bu da onu yaklaşık 103 kopya/mL'lik bir LOD yapar.Bunun kabarcık karışımının yüksek verimliliğinden kaynaklanabileceğini varsaydık.Sallayarak karıştırma (geleneksel RT-PCR işlemiyle aynı karıştırma yöntemi), flakon karıştırma (bu yöntem, 0,12 bar'da 3 saniye) ve kontrol grubu olarak karıştırma dahil olmak üzere çeşitli karıştırma yöntemlerini değerlendirmek için saflaştırılmış IAV RNA üzerinde PCR test deneyleri yapıldı. ..Sonuçlar Ek Şekil S12'de bulunabilir.Daha yüksek bir RNA konsantrasyonunda (106 kopya/mL), farklı karıştırma yöntemlerinin Ct değerlerinin kabarcıklı karıştırma ile hemen hemen aynı olduğu görülebilir.RNA konsantrasyonu 102 kopya/mL'ye düştüğünde, çalkalama karışımı ve kontrollerde Ct değeri yoktu, kabarcık karışımı yöntemi ise hala 38'lik Ct eşiğinin altında olan 36,9'luk bir Ct değeri verdi. Sonuçlar, baskın bir karıştırma karakteristiğini göstermektedir. FAST-POCT platformunun duyarlılığının neden geleneksel RT-PCR'den biraz daha yüksek olduğunu da açıklayabilen, diğer literatürde de gösterilen veziküller.Şek.Şekil 5b, 101 ila 106 kopya/ml arasında değişen saflaştırılmış IBV RNA numunelerinin PCR analizinin sonuçlarını gösterir.Sonuçlar IAV testine benzerdi; R2 = 0,994 ve 102 kopya/mL LOD elde edildi.
Negatif kontrol (NC) olarak TE tamponu kullanılarak 106 ila 101 kopya/mL arasında değişen IAV konsantrasyonlarına sahip influenza A virüsünün (IAV) PCR analizi.(i) Gerçek zamanlı floresans eğrisi.(ii) FAST ve geleneksel test yöntemleri için logaritmik IAV RNA konsantrasyonu ile döngü eşiği (Ct) arasındaki doğrusal kalibrasyon eğrisi.(iii) 40 döngüden sonra IAV FAST-POCT floresan görüntüsü.b, (i) gerçek zamanlı floresan spektrumu ile influenza B virüsünün (IBV) PCR tespiti.(ii) Doğrusal kalibrasyon eğrisi ve (iii) 40 döngüden sonra FAST-POCT IBV floresans görüntüsü.FAST-POCT platformunu kullanan IAV ve IBV için alt tespit sınırı (LOD) 102 kopya/mL idi; bu, geleneksel yöntemlerden (103 kopya/mL) daha düşüktür.c IAV ve IBV için multipleks test sonuçları.Olası kontaminasyonu ve arka plan amplifikasyonunu önlemek için GAPDH pozitif kontrol olarak kullanıldı ve TE tamponu negatif kontrol olarak kullanıldı.Dört farklı numune türü ayırt edilebilir: (1) Yalnızca GAPDH negatif numuneler (“IAV-/IBV-”);(2) IAV ve GAPDH ile IAV enfeksiyonu (“IAV+/IBV-”);(3) IBV ve GAPDH ile IBV enfeksiyonu (“IAV-/IBV+”);(4) IAV, IBV ve GAPDH ile IAV/IBV enfeksiyonu (“IAV+/IBV+”).Noktalı çizgi eşik çizgisini temsil eder.n = 6 biyolojik olarak bağımsız deney yapıldı, veriler ± standart sapma olarak gösterildi.Ham veriler ham veri dosyaları olarak sunulur.
Şek.Şekil 5c, IAV/IBV için çoğullama testinin sonuçlarını gösterir.Burada, saflaştırılmış RNA yerine örnek çözelti olarak virüs lizatı kullanıldı ve FAST-POCT platformunun dört farklı reaksiyon odasına IAV, IBV, GAPDH (pozitif kontrol) ve TE tamponu (negatif kontrol) için dört primer eklendi.Olası kontaminasyonu ve arka plan iyileştirmesini önlemek için burada pozitif ve negatif kontroller kullanılır.Testler dört gruba ayrıldı: (1) GAPDH-negatif numuneler (“IAV-/IBV-”);(2) IAV ile enfekte (“IAV+/IBV-”), IAV ve GAPDH'ye karşı;(3) IBV-.enfekte (“IAV-”) -/IBV+”) IBV ve GAPDH;(4) IAV, IBV ve GAPDH ile IAV/IBV (“IAV+/IBV+”) enfeksiyonu.Şek.Şekil 5c, negatif örnekler uygulandığında pozitif kontrol odasının floresans yoğunluğunun ΔRn'sinin 0,860 olduğunu ve IAV ve IBV'nin ΔRn'sinin negatif kontrole (0,002) benzer olduğunu gösterir.IAV+/IBV-, IAV-/IBV+ ve IAV+/IBV+ grupları için IAV/GAPDH, IBV/GAPDH ve IAV/IBV/GAPDH kameraları sırasıyla önemli floresans yoğunluğu gösterirken, diğer kameralar arka planda floresans yoğunluğu bile gösterdi termal döngüden sonra 40 seviyesi.Yukarıdaki testlerden, FAST-POCT platformu olağanüstü bir özgüllük gösterdi ve aynı anda farklı influenza virüslerinin patotipini belirlememize olanak sağladı.
FAST-POCT'nin klinik uygulanabilirliğini doğrulamak için IB hastalarından (n=18) ve IB olmayan kontrollerden (n=18) 36 klinik örneği (burun sürüntü örnekleri) test ettik (Şekil 6a).Hasta bilgileri Ek Tablo 3'te sunulmaktadır. IB enfeksiyon durumu bağımsız olarak doğrulandı ve çalışma protokolü Zhejiang Üniversitesi Birinci Bağlı Hastane (Hangzhou, Zhejiang) tarafından onaylandı.Her hasta örneği iki kategoriye ayrıldı.Biri FAST-POCT kullanılarak işlendi, diğeri ise bir masaüstü PCR sistemi (SLAN-96P, Çin) kullanılarak işlendi.Her iki test de aynı saflaştırma ve tespit kitlerini kullanır.Şek.Şekil 6b, FAST-POCT ve geleneksel ters transkripsiyon PCR'nin (RT-PCR) sonuçlarını gösterir.Floresan yoğunluğunu (FAST-POCT) -log2(Ct) ile karşılaştırdık; burada Ct, geleneksel RT-PCR için döngü eşiğidir.İki yöntem arasında iyi bir uyum vardı.FAST-POCT ve RT-PCR, Pearson oranı (r) değeri 0,90 ile güçlü bir pozitif korelasyon gösterdi (Şekil 6b).Daha sonra FAST-POCT'un tanısal doğruluğunu değerlendirdik.Pozitif ve negatif numuneler için floresans yoğunluğu (FL) dağılımları, bağımsız bir analitik ölçüm olarak sağlanmıştır (Şekil 6c).FL değerleri IB hastalarında kontrollere göre anlamlı derecede yüksekti (****P = 3,31 × 10-19; iki kuyruklu t-testi) (Şekil 6d).Daha sonra IBV alıcı çalışma özellikleri (ROC) eğrileri çizildi.1 eğrisinin altındaki alanla tanısal doğruluğun çok iyi olduğunu bulduk (Şekil 6e).2020 yılı itibarıyla Çin'de COVID-19 nedeniyle zorunlu maske siparişi verilmesi nedeniyle IBD'li hastaları tanımlamadığımızı, dolayısıyla tüm pozitif klinik örneklerin (yani nazal sürüntü örnekleri) yalnızca IBV için olduğunu lütfen unutmayın.
Klinik çalışma tasarımı.18 hasta numunesi ve 18 grip dışı kontrol dahil olmak üzere toplam 36 numune, FAST-POCT platformu ve geleneksel RT-PCR kullanılarak analiz edildi.b FAST-POCT PCR ile geleneksel RT-PCR arasındaki analitik tutarlılığı değerlendirin.Sonuçlar pozitif korelasyon gösterdi (Pearson r = 0,90).c 18 IB hastası ve 18 kontroldeki floresan yoğunluk seviyeleri.d IB hastalarında (+), FL değerleri kontrol grubuna (-) göre anlamlı derecede yüksekti (****P = 3,31 × 10-19; iki kuyruklu t-testi; n = 36).Her kare grafik için ortadaki siyah işaret medyanı temsil eder ve kutunun alt ve üst çizgileri sırasıyla 25. ve 75. yüzdelik dilimleri temsil eder.Bıyıklar, aykırı değer olarak kabul edilmeyen minimum ve maksimum veri noktalarına kadar uzanır.e ROC eğrisi.Noktalı çizgi d, ROC analizinden tahmin edilen eşik değerini temsil eder.IBV için AUC 1'dir. Ham veriler, ham veri dosyaları olarak sağlanır.
Bu yazımızda ideal bir POCT için gerekli özelliklere sahip olan FAST'ı sunuyoruz.Teknolojimizin avantajları şunlardır: (1) Çok yönlü dozaj (kademeli, eş zamanlı, sıralı ve seçici), talep üzerine serbest bırakma (uygulanan basıncın hızlı ve orantılı olarak serbest bırakılması) ve güvenilir çalışma (150 derecede titreşim) (2) uzun süreli depolama (2 yıllık hızlandırılmış test, yaklaşık %0,3 kilo kaybı);(3) geniş bir ıslanabilirlik ve viskozite aralığına (5500 cP'ye kadar viskozite) sahip sıvılarla çalışabilme yeteneği;(4) Ekonomik (FAST-POCT PCR cihazının tahmini malzeme maliyeti yaklaşık 1 ABD Dolarıdır).Çok işlevli dağıtıcıların birleştirilmesiyle influenza A ve B virüslerinin PCR tespiti için entegre bir FAST-POCT platformu gösterildi ve uygulandı.FAST-POCT yalnızca 82 dakika sürer.36 nazal sürüntü numunesi ile yapılan klinik testler, floresans yoğunluğunda standart RT-PCR ile iyi bir uyum gösterdi (Pearson katsayıları > 0,9).36 nazal sürüntü numunesi ile yapılan klinik testler, floresans yoğunluğunda standart RT-PCR ile iyi bir uyum gösterdi (Pearson katsayıları > 0,9).36'lı Клинические тесты соответствие интенсивности стан дартной ОТ-ПЦР (коэффициенты Пирсона > 0,9).36 nazal sürüntü örneğiyle yapılan klinik testler, standart RT-PCR'nin floresans yoğunluğuyla iyi bir uyum gösterdi (Pearson katsayıları > 0,9).RT-PCR Клинические спытания 36 образцов мазков из носа показали хорошее совпадение интенсивности флуоресценции стан дартной ОТ-ПЦР (коэффициент Пирсона > 0,9).36 nazal sürüntü örneğinin klinik testi, floresans yoğunluğunun standart RT-PCR ile iyi bir uyum içinde olduğunu gösterdi (Pearson katsayısı > 0,9).Bu çalışmaya paralel olarak, ortaya çıkan çeşitli biyokimyasal yöntemler (örneğin, plazma termal döngüsü, amplifikasyon içermeyen immünolojik testler ve nanobody işlevselleştirme analizleri) POCT'deki potansiyellerini göstermiştir.Bununla birlikte, tamamen entegre ve sağlam bir POCT platformunun bulunmaması nedeniyle, bu yöntemler kaçınılmaz olarak ayrı ön işleme prosedürlerini (örn., RNA izolasyonu44, inkübasyon45 ve yıkama46) gerektirir; bu da, gelişmiş POCT işlevlerini uygulamak için bu yöntemlerle mevcut çalışmayı daha da tamamlar. gerekli parametreler.yanıt olarak getir çıktı performansı.Bu çalışmada, FAST valfini etkinleştirmek için kullanılan hava pompası, tezgah üstü bir cihaza entegre edilebilecek kadar küçük olmasına rağmen (Şekil S9, S10), yine de önemli miktarda güç tüketiyor ve gürültü üretiyor.Prensip olarak, daha küçük form faktörlü pnömatik pompalar, elektromanyetik kuvvet veya parmakla çalıştırma gibi başka yollarla değiştirilebilir.Diğer iyileştirmeler arasında örneğin kitlerin farklı ve spesifik biyokimyasal analizler için uyarlanması, ısıtma/soğutma sistemleri gerektirmeyen yeni tespit yöntemlerinin kullanılması ve böylece PCR uygulamaları için aletsiz bir POCT platformu sağlanması yer alabilir.FAST platformunun sıvıları manipüle etmek için bir yol sağladığı göz önüne alındığında, önerilen FAST teknolojisinin yalnızca biyomedikal testler için değil aynı zamanda çevresel izleme, gıda kalitesi testleri, malzeme ve ilaç sentezi için de ortak bir platform oluşturma potansiyeli sunduğuna inanıyoruz. ..
İnsan burun sürüntü örneklerinin toplanması ve kullanılması, Zhejiang Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesi Etik Kurulu (IIT20220330B) tarafından onaylandı.30 yaş altı 16 yetişkin, 40 yaş üstü 7 yetişkin ve 19 erkek, 17 kadın olmak üzere 36 nazal sürüntü örneği toplandı.30 yaş altı 16 yetişkin, 40 yaş üstü 7 yetişkin ve 19 erkek, 17 kadın olmak üzere 36 nazal sürüntü örneği toplandı.Было собрано 36 образцов мазков из носа, в которых участие 16 взрослых < 30 лет, 7 взрослых старше yani, 19 ay ve 17 ay.30 yaş altı 16 yetişkin, 40 yaş üstü 7 yetişkin, 19 erkek ve 17 kadından 36 nazal sürüntü örneği toplandı.Demografik veriler Ek Tablo 3'te sunulmaktadır. Tüm katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alınmıştır.Tüm katılımcıların grip olduğundan şüphelenildi ve herhangi bir tazminat ödemeden gönüllü olarak test edildi.
FAST tabanı ve kapağı polilaktik asitten (PLA) yapılmıştır ve Ender 3 Pro 3D yazıcı (Shenzhen Transcend 3D Technology Co., Ltd.) tarafından basılmıştır.Çift taraflı bant, Requires Research, Inc. Model 90880'den satın alınmıştır. 100 um kalınlığındaki PET film, McMaster-Carr'dan satın alınmıştır.Hem yapışkan hem de PET film, Silhouette America, Inc.'in Silhouette Cameo 2 kesicisi kullanılarak kesildi. Elastik film, enjeksiyon kalıplama yoluyla PDMS malzemesinden yapılmıştır.İlk olarak, 200 µm kalınlığındaki bir PET çerçeve bir lazer sistemi kullanılarak kesildi ve 100 µm çift taraflı yapışkan bant kullanılarak 3 mm kalınlığındaki PMMA levhaya yapıştırıldı.Daha sonra PDMS öncüsü (Sylgard 184; Kısım A: Kısım B = 10:1, Dow Corning) kalıba döküldü ve fazla PDMS'yi çıkarmak için bir cam çubuk kullanıldı.70°C'de 3 saat kürlendikten sonra 300 μm kalınlığındaki PDMS filmi kalıptan soyulabilir.
Çok yönlü dağıtım, isteğe bağlı yayınlama ve güvenilir performansa yönelik fotoğraflar, yüksek hızlı bir kamerayla (Sony AX700 1000 fps) çekilir.Güvenilirlik testinde kullanılan yörünge çalkalayıcı SCILOGEX'ten (SCI-O180) satın alınmıştır.Hava basıncı bir hava kompresörü tarafından üretilir ve basınç değerini ayarlamak için çeşitli dijital hassas basınç regülatörleri kullanılır.Akış davranışı test süreci aşağıdaki gibidir.Test cihazına önceden belirlenen miktarda sıvı enjekte edildi ve akış davranışını kaydetmek için yüksek hızlı bir kamera kullanıldı.Daha sonra sabit zamanlarda akış davranışının videolarından hareketsiz görüntüler alındı ve kalan alan, Image-Pro Plus yazılımı kullanılarak hesaplandı ve bu daha sonra hacmi hesaplamak için kamera derinliği ile çarpıldı.Akış davranışı test sisteminin ayrıntıları Ek Şekil S4'te bulunabilir.
Flakon karıştırma cihazına 50 µl mikro boncuk ve 100 µl deiyonize su enjekte edin.Yüksek hızlı bir kamera ile her 0,1 saniyede bir 0,1 bar, 0,15 bar ve 0,2 bar basınçta karma performans fotoğrafları çekildi.Fotoğraf işleme yazılımı (Photoshop CS6) kullanılarak bu görüntülerden harmanlama işlemi sırasında piksel bilgisi elde edilebilmektedir.Ve aşağıdaki Denklem 53 ile karıştırma verimliliği elde edilebilir.
burada M karıştırma verimliliğidir, N toplam örnek piksel sayısıdır ve ci ve \(\bar{c}\) normalleştirilmiş ve beklenen normalleştirilmiş konsantrasyonlardır.Karıştırma verimliliği 0 (%0, karıştırılmamış) ile 1 (%100, tamamen karıştırılmış) arasında değişir.Sonuçlar Ek Şekil S6'da gösterilmektedir.
IAV ve IBV RNA örnekleri (kat. no. RR-0051-02/RR-0052-02, Liferiver, Çin), Tris-EDTA tamponu (TE tampon no. B541019) dahil olmak üzere IAV ve IBV için gerçek zamanlı RT-PCR kiti , Sangon Biotech, Çin), Pozitif Kontrol RNA Saflaştırma Kiti (Parça No. Z-ME-0010, Liferiver, Çin) ve GAPDH Çözümü (Parça No. M591101, Sangon Biotech, Çin) ticari olarak mevcuttur.RNA saflaştırma kiti, bir bağlama tamponu, yıkama A, yıkama W, eluent, manyetik mikro boncuklar ve bir akrilik taşıyıcı içerir.IAV ve IBV gerçek zamanlı RT-PCR kitleri, IFVA nükleik asit PCR tespit karışımını ve RT-PCR enzimini içerir.500 µl bağlama tamponu solüsyonuna 6 µl AcrylCarrier ve 20 µl manyetik boncuk ekleyin, iyice çalkalayın ve ardından boncuk solüsyonunu hazırlayın.A ve W yıkamalarına 21 ml etanol ekleyin, sırasıyla A ve W yıkama solüsyonlarını elde etmek için iyice çalkalayın.Daha sonra, IFVA nükleik asidi ve 1 ul RT-PCR enzimi içeren 18 ul floresan PCR karışımı, 1 ul TE çözeltisine ilave edildi, çalkalandı ve birkaç saniye santrifüj edilerek 20 ul IAV ve IBV primerleri elde edildi.
Aşağıdaki RNA saflaştırma prosedürünü izleyin: (1) RNA adsorpsiyonu.1,5 ml'lik bir santrifüj tüpüne 526 µl pelet solüsyonu pipetleyin ve 150 µl numune ekleyin, ardından tüpü 10 kez manuel olarak yukarı ve aşağı sallayın.Karışımın 676 ul'sini afinite kolonuna aktarın ve 1,88 x 104 g'de 60 saniye boyunca santrifüjleyin.Daha sonra gelen drenler atılır.(2) Yıkamanın ilk aşaması.Afinite kolonuna 500 µl yıkama solüsyonu A ekleyin, 1,88 x 104 g'de 40 saniye santrifüjleyin ve harcanan solüsyonu atın.Bu yıkama işlemi iki kez tekrarlandı.(3) yıkamanın ikinci aşaması.Afinite kolonuna 500 µl yıkama solüsyonu W ekleyin, 1.88x104 g'de 15 saniye santrifüj edin ve harcanan solüsyonu atın.Bu yıkama işlemi iki kez tekrarlandı.(4) Elüsyon.Afinite kolonuna 200 ul eluat ekleyin ve 2 dakika boyunca 1,88 x 104 g'de santrifüjleyin.(5) RT-PCR: Elüat, bir PCR tüpündeki 20 ul primer çözeltisine enjekte edildi, ardından tüp, RT-PCR işlemini gerçekleştirmek için bir gerçek zamanlı PCR test aparatına (SLAN-96P) yerleştirildi.Tüm tespit süreci yaklaşık 140 dakika sürer (RNA saflaştırması için 20 dakika ve PCR tespiti için 120 dakika).
526 ul boncuk çözeltisi, 1000 ul yıkama çözeltisi A, 1000 ul yıkama çözeltisi W, 200 ul eluat ve 20 ul primer çözeltisi ön olarak eklendi ve M, W1, W2, E bölmelerinde ve PCR saptama odalarında saklandı.Platform montajı.Daha sonra numunenin 150 ul'si M bölmesine pipetlendi ve FAST-POCT platformu Ek Şekil S9'da gösterilen test cihazına yerleştirildi.Yaklaşık 82 dakika sonra test sonuçları açıklandı.
Aksi belirtilmediği sürece tüm test sonuçları, yalnızca FAST-POCT platformu ve biyolojik olarak bağımsız numuneler kullanılarak minimum altı tekrardan sonra ortalama ± SD olarak sunulur.Hiçbir veri analizin dışında tutulmadı.Deneyler rastgele değildir.Araştırmacılar deney sırasında grup görevlerine kör değildi.
Çalışma tasarımı hakkında daha fazla bilgi için bu makaleyle bağlantılı Doğa Araştırma Raporu özetine bakın.
Bu çalışmanın sonuçlarını destekleyen veriler Ek Bilgilerde mevcuttur.Bu makale orijinal verileri sağlar.
Chagla, Z. & Madhukar, P. Zengin ülkelerdeki COVID-19 destekçileri herkes için aşıların yapılmasını geciktirecek.Chagla, Z. & Madhukar, P. Zengin ülkelerdeki COVID-19 destekçileri herkes için aşıların yapılmasını geciktirecek.Chagla, Z. ve Madhukar, P. Zengin ülkelerdeki COVID-19 destekleyicileri, herkes için aşıların yapılmasını geciktirecek.Chagla, Z. ve Madhukar, P. Zengin ülkelerdeki COVID-19 yeniden aşılaması herkes için aşılamayı geciktirecektir.Ulusal tıp.27, 1659–1665 (2021).
Faust, L. ve diğerleri.Düşük ve orta gelirli ülkelerde SARS-CoV-2 testi: özel sağlık sektöründe bulunabilirlik ve karşılanabilirlik.mikrobiyal enfeksiyon.22, 511–514 (2020).
Dünya Sağlık Örgütü.Seçilmiş tedavi edilebilir cinsel yolla bulaşan enfeksiyonların küresel yaygınlığı ve görülme sıklığı: bir inceleme ve tahminler.Cenevre: WHO, WHO/HIV_AIDS/2 https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/66818/WHO_HIV_AIDS_2001.02.pdf (2001).
Fenton, EM ve ark.Çoklu 2D kalıplanmış yan akış test şeritleri.AS uygulaması.gidilen okul.Inter Milan.1, 124–129 (2009).
Schilling, KM ve ark.Tamamen kapalı mikroakışkan kağıt bazlı analiz cihazı.anüs.Kimyasal.84, 1579–1585 (2012).
Lapenter, N. ve diğerleri.Enzimle modifiye edilmiş elektrotlarla birleştirilmiş rekabetçi kağıt bazlı immünokromatografi, idrar kotinininin kablosuz izlenmesine ve elektrokimyasal olarak belirlenmesine olanak tanır.Sensörler 21, 1659 (2021).
Zhu, X. ve ark.Bir glukometre kullanarak çok yönlü bir nanozim entegreli yanal sıvı platformuyla hastalık biyobelirteçlerinin miktarının belirlenmesi.biyolojik sensör.Biyoelektronik.126, 690–696 (2019).
Boo, S. ve ark.Konkanavalin A-insan koryonik gonadotropin-Cu3(PO4)2 hibrit nanoçiçekleri, manyetik ayırma ve akıllı telefon okuması kullanılarak patojenik bakterilerin tespiti için gebelik test şeridi.Mikrobilgisayar.Dergi.185, 464 (2018).